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真菌毒素是真菌在適宜條件下產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物，能夠引發(fā)人類、動物各種急、慢性疾病。我國高度重視真菌毒素污染問題，GB 2761-2017 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素* 規(guī)定了食品中黃曲meidu素B1、黃曲meidu素M1、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、展青霉素、赭曲霉毒素A及玉米赤霉烯酮的*。據(jù)報(bào)道我國每年有3100萬噸糧食在生產(chǎn)、儲存、運(yùn)輸過程中被真菌污染，約占糧食年總產(chǎn)量的6.2%。為了保證我國糧食質(zhì)量安全，避免不必要的經(jīng)濟(jì)損失，及時快速監(jiān)測真菌毒素污染種類、水平及其風(fēng)險(xiǎn)尤為重要。

由于真菌毒素種類多樣，且存在協(xié)同污染，為確保全面、快速的了解糧食中真菌毒素的污染情況，迫切需要一種簡單、快速、靈敏、同時準(zhǔn)確測定糧食中多種真菌毒素的方法。目前真菌毒素的前處理檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法、免疫親和柱方法等。

基于抗原抗體相互作用的酶聯(lián)免疫吸附法雖有較高的選擇性，但無法準(zhǔn)確定量，同時由于前處理簡單，沒有有效的凈化，易受基質(zhì)干擾，產(chǎn)生假陽性。免疫親和柱前處理凈化方法由于其特異性吸附，凈化效果好，但是一方面操作復(fù)雜，另外一方面成本較高，不適合大規(guī)模檢測。

給大家分享使用QuEChERS作為前處理凈化的方法，操作簡單，重復(fù)性好，回收率高。采用Accucore aQ HPLC 色譜柱分離，表面多孔增強(qiáng)核技術(shù)的運(yùn)用,兼容100%水相，同時增強(qiáng)了對極性化合物的保留及選擇性。采用LC-MS/MS方法，15min內(nèi)快速完成低濃度真菌毒素的分析，該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析檢測。

樣品前處理

1

樣品提取

1

稱取5g均質(zhì)后的樣品放入50mL離心管中，加入10 mL 水，震搖15 min

2

再加入10mL 2%甲酸乙腈，旋渦混合1min

3

加入HyperSep萃取鹽包(P/N 60105-332-B：4g MgSO?,1g NaCl) ，快速震搖1min.

4

≥3000g 離心5min

2

樣品凈化

1

移取1mL上清液到HyperSep凈化管中（P/N：60105-204-B：QuEChERS  2mL 離心管 帶150mg MgSO?, 50mg PSA 50mg C18 ），震搖30s， ≥3000g 離心5min

2

移取500μL凈化液，使用純水稀釋4倍，過0.2μm濾膜后上機(jī)檢測

色譜條件

表1.梯度洗脫程序（點(diǎn)擊查看大圖）

質(zhì)譜條件

表2.化合物及質(zhì)譜采集參數(shù)（點(diǎn)擊查看大圖）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

標(biāo)準(zhǔn)品及樣品加標(biāo)譜圖

圖1.12種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜（濃度見表3）（點(diǎn)擊查看大圖）

圖2.玉米中12種真菌毒素加標(biāo)圖譜（加標(biāo)濃度見表3）（點(diǎn)擊查看大圖）

采用上述分析方法，12 種真菌毒素在15 min內(nèi)均可獲得良好的色譜峰，圖1為 12種真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜（濃度見表3），各化合物靈敏度測試結(jié)果見表3，LOD在0.1-2ug/kg之間。12 種真菌毒素相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD% 均小于15%（見表3）

表3.12種真菌毒素回收率數(shù)據(jù)及LOD（點(diǎn)擊查看大圖）

結(jié)論

開發(fā)了一種快速簡單的QuEChERS前處理方法用于糧谷中12種典型真菌毒素的分析，使用Accucure aQ表面多孔增強(qiáng)核色譜柱，增強(qiáng)了對極性化合物的保留及選擇性，峰形良好。采用LC-MS/MS方法，15min內(nèi)快速完成低濃度真菌毒素的分析，并獲得較好的回收率，回收率范圍60-110%，LOD為0.1-2 ug/kg，該方法適合于糧谷中多種真菌毒素的分析。